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標(biāo)本因素對ELISA測定的影響
點(diǎn)擊次數(shù):1175 更新時間:2016-12-21

    標(biāo)本因素對ELISA測定的影響
 

    ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡單等優(yōu)點(diǎn),但是在具體實驗過程中影響因素較多,并且要按照嚴(yán)格的說明要求,在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外,有時??梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性結(jié)果)。
    引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標(biāo)本因素對ELISA測定的影響做如下討論。

 

    人elisa試劑盒血清是zui常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致。
    內(nèi)源性物質(zhì)
    普遍認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
 

   (1)類風(fēng)濕因子
    人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。

 

    (2)補(bǔ)體
    ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q可以將二者
    連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。

 

    (3)嗜異性抗體
    人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。

 

    (4)嗜靶抗原的自身抗體
    抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。

 

    (5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體
    臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig(s),從而克服由于上述原因造成的假陽性。
 

   (6)交叉反應(yīng)物質(zhì)
    類digaoxin、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
 

   (7)標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用。

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