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上海遠慕生物科技有限公司

上海遠慕講述:人層連蛋白/板層素ELISA試劑盒的操作
點擊次數(shù):883 更新時間:2017-06-21

  人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒的操作步驟:

   1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。


    2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。


   3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。


   4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。


   5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml


  6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

 

技術原理:

 

    (1)抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

 

    (2)結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

 

    (3)酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

 

    (4)受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結(jié)合在固相載體上。

 

    (5)此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

 

    (6)加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

  

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