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減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差,您是怎么做的?
點(diǎn)擊次數(shù):653 更新時(shí)間:2017-11-20
   減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差,您是怎么做的?
  做任何實(shí)驗(yàn),都不可能**,我們能做的就是盡zui大的努力減少實(shí)驗(yàn)誤差。在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中,誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差、過(guò)失誤差,而一個(gè)小小的誤差主意能夠影響到實(shí)驗(yàn),那么怎樣才能縮小實(shí)驗(yàn)誤差呢?除了需要細(xì)心之外,還有一些需要重點(diǎn)注意的地方。
 ?、伲簷z驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
 ?、冢菏褂眯?duì)過(guò)的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。
 ?、郏鹤屑?xì)閱讀說(shuō)明書(shū),嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
  ④:洗滌*,如若洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
 ?、荩簢?yán)控反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),酶失活;反應(yīng)時(shí)間過(guò)短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
 ?、蓿鹤⒁庠噭┖斜4嫫?,過(guò)保存期的試劑不能使用。
 ?、撸涸u(píng)估試劑的實(shí)用性,試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。
 ?、啵簢?yán)格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過(guò)短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過(guò)少,易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
 ?、幔杭訕右獪?zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。
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