上海遠(yuǎn)慕【進(jìn)口 國(guó)產(chǎn)】標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品廠家詳細(xì)講述硬組織線粒體分離試劑盒的信息簡(jiǎn)介及其他咨訊，本司所供應(yīng)的試劑盒品種齊全，價(jià)格實(shí)惠，本品屬細(xì)胞組分離類，有效期一般為12個(gè)月，同期分離試劑盒還包含有細(xì)胞線粒體分離試劑盒，組織線粒體分離試劑盒，更多試劑盒品種請(qǐng)來(lái)電!
【信息說(shuō)明】
產(chǎn)品名稱：硬組織線粒體分離試劑盒
供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品廠家
規(guī)格：50T
分類：細(xì)胞組分分離
儲(chǔ)存條件：-20℃,12個(gè)月
用途：適用于快速?gòu)膭?dòng)物硬組織(心肌、骨骼肌)或其他難以分離線粒體的組織中提取線粒體。
注意事項(xiàng)：采用梯度離心法分離線粒體外膜和內(nèi)膜以及基質(zhì)膜,大部分獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜
【簡(jiǎn)介說(shuō)明】
線粒體是細(xì)胞呼吸的主要場(chǎng)所，細(xì)胞活動(dòng)所需的能量主要由在線粒體內(nèi)進(jìn)行的氧化所產(chǎn)生的能量來(lái)供應(yīng)。
硬組織線粒體分離試劑盒(Hard Tissue Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離動(dòng)物硬組織(如骨骼肌)中的線粒體，分離線粒體的同時(shí)可以獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白，適用于從動(dòng)物硬組織(心肌、骨骼肌)或其他難以分離線粒體的組織中提取線粒體。
【操作步驟】
1、清洗：迅速稱重，用預(yù)冷的清洗，棄Wash buffer，冰上剪成大小的組織碎片。
2、裂解：加入Mitochondria Lysis buffer，置于冰浴。
3、勻漿Ⅰ：轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的Dounce勻漿器中，勻漿，或采用電動(dòng)勻漿器，700rpm，8～10次。不同組織或不同勻漿器所需的勻漿次數(shù)有所不同，需自行優(yōu)化。
4、勻漿Ⅱ：4℃攪拌孵育。用等體積的Mitochondria Stock buffer稀釋至勻漿液，再次重復(fù)步驟3。
5、離心：用尼龍網(wǎng)或細(xì)胞篩過濾勻漿液，4℃，離心，以去除細(xì)胞核、未破碎的細(xì)胞和大的膜碎片。
6、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管，4℃離心。注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為6000g離心10min，其缺點(diǎn)是相同數(shù)量細(xì)胞的線粒體抽提得率會(huì)下降。
7、棄上清，沉淀為線粒體，如果希望獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白，應(yīng)在本步驟中收集上清，并且在收集上清時(shí)注意勿觸及沉淀。
8、保存：棄上清，用適當(dāng)緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析，線粒體沉淀應(yīng)重懸于Mitochondria Stock buffer;如果用于線粒體蛋白的分析，獲得的細(xì)胞漿蛋白應(yīng)保存于1×Protein Stock buffer，即按細(xì)胞漿蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合;如果用于雙向電泳，應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)谋４嬉骸?/span>
【注意事項(xiàng)】
1、試劑 (如PMSF)對(duì)于不同實(shí)驗(yàn)不必全部使用，在實(shí)驗(yàn)條件成熟后可以不必使用。
2、分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷，全部操作時(shí)間盡量控制在1h以內(nèi)。
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