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大腸桿菌DH5α化學感受態(tài)細胞使用說明書
點擊次數(shù):456 更新時間:2024-01-31

中文名稱:大腸桿菌DH5α化學感受態(tài)細胞
英文名稱:E.coli DH5α Chemical Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:0.1mL*10

本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率不低于107,適用于高效的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。

基因型表現(xiàn)型
deo R組成型合成脫氧核糖
end A1核酸內(nèi)切酶I缺失
gyr A96具有萘啶酮酸抗性
hsd R17限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169lac基因缺失
rec A1DNA重組活性降低
Rel A1允許在無蛋白質(zhì)合成時有RNA合成
sup E44抑制琥珀突變突變,為某些噬菌體必需
thi-1不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)提供α-互補所需的ω片斷


儲存條件:干冰運輸、-80℃保存,有效期半年。

使用方法:
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,200rpm(小于225rpm)振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意事項:
1、涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000rpm ,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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