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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

遠(yuǎn)慕生物解析人ELISA Kit具體操作步驟
點擊次數(shù):1346 更新時間:2015-11-25

   人ELISA Kit又稱人白介素ELISA試劑盒,主要應(yīng)用于雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白介素水平,用純化的人白介素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素,再與HRP標(biāo)記的白介素抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白介素含量。

  人ELISA Kit白介素試驗步驟分析:

  1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

  4、配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。

  6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

  7、溫育:操作同3。

  8、洗滌:操作同5。

  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11、測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
 

  人ELISA Kit白介素實驗要求:

  1、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2、不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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