細胞培養(yǎng)常見問題，上海遠慕生物技術(shù)人員詳解如下：

    1、如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？

    培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。

    2、何時須更換培養(yǎng)基？

    視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

    3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？

    不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，造成細胞無法存活。

    4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？

    不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

    5、何謂FBS,FCS,CS,HS?

    FBS（fetalbovineserum）和FCS（fetalcalfserum）是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS（calfserum）則是指小牛血清。HS（horseserum）則是指馬血清。

    6、培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？

    一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細胞。

    7、Hank''s平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank''s平衡鹽溶液（HBS）和Earle''s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？

    HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。

    8、細胞之接種密度為何？

    依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

    9、懸浮性細胞應(yīng)如何繼代處理？

    一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度，重復(fù)前述步驟即可。

    10、冷凍管應(yīng)如何解凍？

    取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。