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上海遠(yuǎn)慕講解:大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù):1106 更新時(shí)間:2017-03-16

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 -2(ACE-2)ELISA 試劑盒

 ( 用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi) )

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 ACE-2  單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 ACE-2 與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠 ACE-2 ,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的 Streptavidin 與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,zui后加終止液硫酸,在 450nm 處測 OD 值, ACE-2 濃度與 OD 值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中 ACE-2 濃度。

試劑盒組成 ( 2-8℃ 保存)

     準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.收集標(biāo)本:血清、血漿( EDTA 、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存 48 小時(shí);更長時(shí)間須冷凍( -20 ℃  -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。

2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入 1ml 蒸餾水 混勻,配成 250ng/ml 的溶液  設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管 8 管,*管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在*管中加入 250ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出 500ul 棄去。第八管為空白對照。

3.10 ×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1:10 倍稀釋( 示例: 1ml 濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

4.洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例: 1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)

檢測程序

1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37  120 分鐘。

2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。

3.每孔中加入*抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37  60 分鐘。

4.洗板:同前。

5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板置 37  30 分鐘。

6.洗板:同前。

7.每孔加入底物工作液 100ul ,置 37  暗處反應(yīng) 15 分鐘。

8.每孔加入 100ul 終止液混勻。

9.30 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0nm 處測 吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2.以標(biāo)準(zhǔn)品 25 、 12.5 、 6.25  3.12 、 1.56  0.78 、 0.39  0 ng/ml 為橫坐標(biāo), OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng) ACE-2 含量 即可 。

試劑盒性能

   1. 靈敏度  zui小的 ACE-2  檢測濃度小于 0.2ng/ml 

2.特異性: 可同時(shí)檢測重組或天然的大鼠 ACE-2 。 不與 大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10 %。

注意事項(xiàng)

           1.    以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

           2.    洗滌過程 很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及 OD 值錯(cuò)誤地升高。

    3.    板條開封后剩余板條要再封好,保持 板條干燥 。

   4.    本試劑盒宜置 4o C 冰箱保存。

                   5.    本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

 

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